燕赤霞（郭晋安饰）
个性豪爽、真快、从小受先父教诲，一身正气，斩妖除魔，视鬼如仇，一直替天行道，年龄40岁，人老心不老有时还是超级大帅哥。爱玩女人，云游四海，走哪算哪。巧住西华寺，遇2个鬼婆，树妖姥姥和姑姑，两个老太婆为求修炼，不男不女，专收养下属。她们有四个女妖、小倩、小桐、小琪、小丽。专门为两个老妖送阳气、供男人。燕赤霞巧遇宁采臣，见小倩与他真心相爱，与姑姑斗法，帮了不少忙，郭晋安首次饰演此角，值得一看。
聂小倩（喻音琪饰）
聂小倩为修炼千年的狐妖，在西华寺下，被两个树妖姥姥、姑姑、收留，替她们勾引男人，杀男人，但心却是好的，是好女鬼。见到好书生就放走，一次执行任务时巧遇宁采臣，于是凄凄凉凉飘飘勾引，见其心地善良放走，此时宁早已对小倩一见钟情。故事发展后来，小倩与彩臣真心相爱。不巧被姐姐小琪发现，报告姑姑，树妖鬼三娘姑姑其实心很好，也很偏爱小倩，帮了不少忙，后由小桐报告姥姥。姥姥大怒，必须拆散，并责罚小倩另起永世不得超生。但她是女主角，两人真心相爱走到了最后。香港女歌手TVB艺员的喻音琪首次出演传奇的绝世佳人女鬼聂小倩，她说自己压力也很大，一定会创造一个更完美的电视剧版本的凄美佳人。
宁采臣（方力申饰）
香港著名男歌手，帅哥方力申首次出演古装文弱书生，是个很难挑战的角色，一向深情帅哥踩的方力申在里面饰演一个只知道读书的男人，当遇上小倩后，被她深深迷住，也与燕赤霞结识成好哥们级，在姥姥阻拦下，和燕赤霞刚开始阻拦下，他用尽全身力气，就是爱小倩。感动天地，后姥姥派另一个权位高的树妖姑姑去带走小倩，他痛苦不堪，居然放弃读书，苦加练武，成为无敌的宁采臣，不再是文弱书生，导演的巧妙安排让方力申很痛快，他说自己拍打斗的场面不够刺激不够劲，很爽。姑姑为了成全小倩，不惜自愿死在宁采臣的手下。方力申与喻音琪合作也很好，他说；以前就跟他合作过几部电影，我是金牌大风、她是英皇娱乐的，除了钟欣桐、邓丽欣外，最想合作女星就是她。喻音琪也说；很开心能和小方再次合作，并一直夸他是帅哥。
天仙童姥（邵音音饰）
香港邵氏艳星，老牌级的女星邵音音这次在剧中是首次出演最坏、最奸诈、无恶不作的树妖，还要扮作半男扮女，可让邵音音吃苦，本来年纪就很大，又要塑造这样一个角色，她自己都说；很辛苦。不过没关系，我很开心。
周丽淇饰小丽
周丽淇不仅是香港女歌手，也是无线TVB出色的演员，也演了不少剧集的她，在此剧中饰演一个修炼成精的鱼妖，在姥姥门下从来都是温柔，深情的女子，与小倩是最好的姐妹。她在剧中也有很妖艳的装扮，自从认识同样是官宦子弟帅哥的田铁生，两人相爱，但最后田铁生知道她是鱼妖后，不忍心接受，黯然离开，小丽非常伤心，而姥姥知道小丽也与男人相爱时更生气，天天折磨小丽，田铁生遇方生和马迪龙，在马迪龙的帮助下，从新找到小丽，姥姥不肯放过，燕赤霞正好和马迪龙一同与姥姥作战，救出小丽，田铁生与小丽有情人终成眷属。
吴卓羲饰田铁生
同样为TVB小生的吴卓羲也踩的非常开心，期待吴卓羲出色的演出。他也是非常容易塑造了这个爱上女妖的帅哥书生。吴卓羲称；很开心和周丽淇合作拍戏，周丽淇很美。相对起来，还是吴卓羲最帅一些。
钟欣桐（阿娇）饰小桐
阿娇复出后接拍不少电影与剧集，导演让她饰演小桐这个梁咏琪后的第二个坏女妖角色，花妖小桐无恶不作，但自从遇上林峰后，慢慢的喜欢上林峰，林峰演的阿峰则与宁采臣一样是个只会读书的傻书生，阿峰也慢慢的喜欢上小桐，两人情投意合，当小桐良心发现，告诉阿峰自己是花妖时，阿峰早已无所谓的讲，就算你是妖，我也爱你，姥姥知道后，很生气，正要准备对付小桐杀掉阿峰时，燕赤霞和马迪龙又从新打伤姥姥。两人得以解救。陈浩民上演搞怪捉妖天师马迪龙
陈浩民在TVB是帅哥小生，他为无线效劳也有二十年了，出演的剧集深受喜爱，他一直以帅气搞笑的形象饰演马迪龙这个角色，早期他饰演了许多书生戏和搞怪戏，如经典的《人龙传说》、《云海翻腾孙悟空》、此次他和与自己年龄差不多的郭晋安在一起演对手戏，一个久名的燕赤霞，一个新生的捉妖天师，两人在一起帮助各个女妖和心爱的人在一起时，两人也闹出不少笑话，导演安排由两人的戏为全剧的中心，两人非常搞笑，闹出不少笑话，最后清高自傲的马迪龙还是最后在大战姥姥和黑山老妖时见证燕赤霞的实力，并拜他为师。
郑秀文饰演苦情秋魔
秋魔其实是姥姥和姑姑的第一个徒弟，在她们之前也是与男子相爱被两个妖婆发现而痛苦折磨，永不超生，被囚禁在西华寺的万丈深渊里，她被囚禁了500年，而后来小倩与宁采臣相爱后被姥姥也打入万丈深渊，但未囚禁，小倩也出不去，其它姐姐们都找到如意郎君，宁采臣也和他们在一块，小倩放心，意外发现了秋魔，秋魔是龙女，因犯了天规被排除仙界，落入姥姥手里，在最后结局时，秋魔出现，原来她在万丈深渊里又修炼了1000年，法力大增，帮助燕赤霞和马迪龙对付姥姥，姥姥被三人打败最后，邪恶的黑山老妖出现，挟持小倩出现，秋魔为救小倩而丧命，临终把自己所有的法力传给小倩。。