左边一组是由巴多罗米奥、安德烈、小雅各三人组成。巴多罗米奥好象怀疑自己的耳朵听错了，从座位上跳起来，手按在桌上，面对耶稣，情绪激动；安德烈双手张开，手指向上。夹在中间的小雅各紧张地由背后伸手到第四个人的肩上，形成两组间的联系。这三个人都面向耶稣。
右边一组由马太、达太和西门组成。三个人听了这骇人听闻的消息后，自发地谈论起什么来，三人的手都伸向画面的中心。
中右一组是多马、老雅各、腓力。多马伸出一个指头，好象在问老师：“有一个人要出卖你？”和他并坐的老雅各张开两手，作惊奇的表示：“这是多么可怕呀！”年轻的腓力则用双手掩着胸部，似乎说：“难道在怀疑我对老师有背叛行为吗？”
中左一组的彼得、约翰和犹大三人最富有表情，也是画上的主要角色。坐在耶稣旁边的约翰歪着身子眼睛向下，两手手指交叉，有气无力地放在桌上，作出忧愁状。火性的彼得，则情绪激昂，他从座位上跳起，似乎在问约翰，叛徒是谁？他手中已握着一把刚切了面包的刀，无意地靠近了犹大的肋部。而犹大，听了耶稣的话后，情绪紧张，身子稍向后仰，右臂支在桌上，右手紧握钱袋，露出一种抑制不住的惊恐。这十三个人中，只有犹大的脸色是灰暗的。