正在读中学的少年迈尔斯(沙梅克·摩尔·沙梅克·摩尔配音)意外被一只被放射性污染的蜘蛛咬伤，随后身体发生了奇怪的变化。一次偶然的机会，他目睹了蜘蛛侠(由杰克·约翰逊的杰克·M·约翰逊配音)和犯罪头目金斌(由列维·施瑞博尔的列维·施瑞博尔配音)之间的战斗。为了阻止金，用时空对撞机扰乱宇宙，蜘蛛侠最后壮烈牺牲。没过多久，来自平行宇宙的颓废派彼得·帕克出现在迈尔斯面前。为了阻止金兵的阴谋，帮助这个帕克回到自己的宇宙，他们闯入了金兵的老巢。在这个过程中，他们遭到了章鱼博士和流浪者的攻击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、影蜘蛛侠、蜘蛛侠、蜘蛛女相继出现。他们联合起来打击邪恶势力...